介导分泌表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组杆状病毒的构建

• 作者: 叶昱 廖明 张春雷 张杰 朱俊 樊惠英 靳立明 高又文
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 ORF2基因 EGT信号肽 Cap蛋白 重组杆状病毒
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 动物科学与兽医学
• 页码范围: 564-568
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4329字
• 语种: 中文

摘要

应用杆状病毒表达系统，将猪圆环病毒2型ORF2基因插入供体质粒pFastBac TM Dual pH启动子控制下的多克隆位点，引入EGT信号肽取代ORF2原有核定位信号肽以实现在昆虫细胞中分泌型表达，并在C端融合6个组氨酸标签以便于后期的纯化。将构建质粒转化DH10Bac感受态细胞获得重组穿梭载体，提取重组Bacmid质粒。将阳性重组Bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞，72 h收集培养上清液获得重组杆状病毒。间接免疫荧光试验和Western-blot表明，该重组杆状病毒可以在昆虫细胞实现猪圆环病毒2型Cap蛋白的分泌表达。