基于双抗夹心的Cry1B毒素蛋白质TRFIA检测方法的建立与评价

• 作者: 刘媛 刘贤进 张存政 张霄 徐重新 陈莎莎 黄鹰
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 时间分辨免疫分析 单链抗体 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏·质量安全
• 页码范围: 184-188
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4347字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2013.01.032

摘要

为了建立检测Cry1B毒素蛋白质的双抗夹心时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法,利用稀土元素Eu3+作为示踪剂,以可溶性表达的抗Cry1B毒素蛋白质单链抗体(scFv)作为捕获抗体,以免疫兔血清获得的抗Cry1B毒素蛋白质多克隆抗体为检测抗体,建立检测Cry1B抗原的TRFIA技术,并对其进行方法学的综合评价.通过正交试验,获得的最佳单链抗体(Capture antibody)、多克隆抗体(Detection antibody)、Eu3+标记的二抗(Tracer antibody)浓度分别是2.500μg/ml、2.000 μg/ml、1.000μg/ml.标准检测曲线灵敏度为0.170 ng/ml,线性测量范围为1.000～ 800.000 ng/ml.抗原类似物间无交叉反应.Cry1B毒蛋白质在大米中添加回收的批内变异系数为3.8％～6.6％、平均回收率为80.5％～ 84.8％,批间变异系数为2.2％ ～8.5％、平均回收率为84.1％ ～ 88.4％.表明本试验建立的双抗夹心Cry1B-TRFIA检测范围宽,特异性强,重复性和稳定性好.