CARP1基因克隆、表达及其泛素连接酶活性的鉴定

• 作者: 何湘 刘京梅 孙走南 张睿 杨益 苏文莉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: caspase 8/10相关RING结构域蛋白1 真核表达 泛素连接酶 细胞生长
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 53-56
• 分类号: Q78|Q25
• 字数: 3117字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.01.012

摘要

目的:克隆并表达caspase-8/10相关RING结构域蛋白1(CARP1)基因,检测其泛素连接酶活性.方法:提取结肠癌HCT116细胞总RNA,RT-PCR扩增CARP1基因,将其克隆到真核表达载体pcDNA3-Flag中,序列正确的阳性克隆进行扩增,提取质粒转染至293T细胞中进行瞬时表达,通过体内泛素化检测其泛素化酶活性,通过萤光素酶报告基因的方法检测其对NF-κB转录活性的影响,利用细胞生长曲线检测CARP1基因对结肠癌细胞生长的影响.结果:免疫印迹实验表明CARP1基因在293T细胞中获得有效表达;免疫共沉淀实验表明,当CARP1存在时,受体相互作用蛋白1(RIP1)被泛素化;萤光素酶实验结果表明CARP1抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)引起的NF-κB报道基因的激活;通过生长曲线发现CARP1能促进结肠癌细胞系HCT116生长,并能部分抵抗顺铂抑制细胞生长的作用.结论:构建的人CARP1基因真核表达载体在293T细胞中获得表达,表达产物具有RIP1泛素连接酶的活性,可抑制TNFα引起的NF-κB报告基因的激活,并且促进结肠癌细胞的生长,为进一步的基因功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何湘	军事医学科学院疾病预防控制所	13	48	4.0	6.0
2	张睿		19	36	3.0	5.0
3	孙走南	军事医学科学院疾病预防控制所	5	6	2.0	2.0
4	刘京梅	军事医学科学院疾病预防控制所	5	48	3.0	5.0
5	苏文莉	军事医学科学院疾病预防控制所	8	34	3.0	5.0
6	杨益	军事医学科学院疾病预防控制所	2	3	1.0	1.0