多效生长因子基因转染小鼠脂肪来源干细胞的实验研究

• 作者: 杨雪梅 袁惠 赵梓亦 辜海英 陈昌金
• 来源期刊: 中国修复重建外科杂志
• 关键词: 血管组织工程 脂肪来源干细胞 转染 多效生长因子基因 基因治疗 小鼠
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 干细胞与组织工程
• 页码范围: 897-901
• 页数: 5页
• 语种: 中文
• DOI: 10.7507/1002-1892.20130199

摘要

目的 探讨多效生长因子基因(pleiotrophin,Ptn)转染小鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)作为组织工程血管的重建种子细胞的可行性,并检测其基因表达,为缺血性病损治疗提供新手段. 方法 取3只清洁级近交系C57BL/6W雌性小鼠(体重15～20 g)腹股沟皮下脂肪,采用酶消化法体外分离、培养ADSCs,流式细胞仪行细胞表面标志物CD29、CD44鉴定.实验分为转染pIRES2-LEGFPN1组(含Ptn基因编码序列,A组)和转染pLEGFP-N1负对照组(含GFP基因编码序列,B组).ADSCs转染后,A组以最佳筛选浓度200 μg/mL的G418对转染后细胞进行筛选,流式细胞仪鉴定转染后细胞免疫表型.实时荧光定量PCR、Western blot检测A、B组细胞Ptn基因和PTN蛋白表达. 结果 实验成功分离、培养小鼠ADSCs;细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.5％、95.8％,双阳性率达93.6％.A组转染Ptn后细胞表面标志物CD29、CD44阳性率分别达99.1％、95.6％,双阳性率达93.4％.实时荧光定量PCR、Western blot检测示,A组Ptn基因和PTN蛋白相对表达水平均显著高于B组(P＜0.05). 结论Ptn基因能转染小鼠ADSCs并高表达PTN蛋白,为组织工程血管构建种子细胞选择提供了新思路.