问号钩端螺旋体磷脂酶C鉴定及其诱导巨噬细胞凋亡机制

• 作者: 严杰 孙爱华 张金良 林旭瑷 楼宏强 赵金方
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 问号钩端螺旋体 磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C 巨噬细胞 胞内游离钙离子浓度 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 727-733
• 页数: 7页
• 字数: 5336字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2013.10.002

摘要

目的：确定问号钩端螺旋体（简称钩体） LB361基因产物磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C （ phosphatidylinositol phospholipase C ，L-PI-PLC）功能及其诱导巨噬细胞凋亡的作用与机制。方法采用生物信息学技术分析问号钩体赖型赖株LB361基因序列中PI-PLC结构功能域。采用原核表达系统表达该基因产物（ rL-PI-PLC）。采用IP3荧光偏振试验了解rL-PI-PLC水解PIP2底物产生IP3的活性。采用实时荧光定量RT-PCR及Western blot法分别检测问号钩体赖株感染人THP-1巨噬细胞时LB361基因转录、表达及分泌情况。构建LB361基因转染THP-1细胞株，分别采用激光共聚焦显微镜法和流式细胞术，检测LB361基因产物THP-1通过IP3引起内质网钙释放，从而导致细胞胞内游离钙离子浓度（[ Ca2＋] i）升高并诱导细胞凋亡的作用。结果 rL-PI-PLC能水解PIP2产生IP3，其Km和Kcat值分别为199μmol/L和8．566×10-5 S-1。问号钩体赖株感染THP-1细胞后，LB361-mRNA及L-PI-PLC蛋白表达水平显著升高并外分泌。与未转染正常细胞比较，LB361基因转染THP -1细胞中IP3浓度及[ Ca2＋] i明显升高，从而引起部分 THP-1细胞发生[ Ca2＋] i 依赖性凋亡。结论问号钩体LB361基因产物是磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C，该酶在问号钩体感染巨噬细胞过程中可引起[ Ca2＋] i升高而导致细胞凋亡。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙爱华		112	523	11.0	15.0
2	严杰	浙江大学医学院病原生物学系	265	1149	14.0	20.0
3	林旭瑷	浙江大学医学院病原生物学系	28	47	4.0	5.0
4	张金良	金华职业技术学院医学院	15	34	3.0	5.0
5	楼宏强	金华职业技术学院医学院	27	63	5.0	6.0
6	赵金方	浙江省中医院检验科	2	5	1.0	2.0