幽门螺杆菌BIB原核表达工程菌的构建及微生物学特性分析

• 作者: 周永君 周法庭 李健春 李婉宜 杨靖 潘兴 王保宁 祝捷 肖继红
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌 原核表达工程菌 Ure CTB 重组多表位
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学与实验研究
• 页码范围: 1451-1454
• 页数: 4页
• 分类号: R378.2
• 字数: 3567字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2013.10.004

摘要

目的 构建融合了幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(Ure I)、尿素酶B亚单位(Ure B)的表位基因及霍乱毒素B亚单位(CTB)的原核表达质粒pET28a(+)/ct B/ure I-B(简称BIB)及其原核表达工程菌,并研究其生物学特性.方法 参考基因库中ure I、ure B、ct B的基因序列,合成不含信号肽的ct B基因及ure I、ure B优势表位基因,串联融合,形成多靶点重组ct B/ure I-B基因(简称BIB基因),并构建pET28a(+)/BIB原核表达质粒,经限制性内切酶Nco I、Xho I酶切以及DNA测序鉴定正确后,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中,构建含BIB基因的原核表达工程菌.经乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳检测重组蛋白(rBIB),Western blot及肌注BALB/c小鼠实验检测rBIB的免疫反应性和免疫原型.结果 构建的原核表达质粒pET28a(+)/BIB,经双酶切和测序分析显示,构建的BIB基因与设计序列100％一致.乳糖诱导后,SDS-PAGE电泳显示在33kD左右出现一条明显蛋白条带,Western blot检测在33kD左右出现特异反应条带,肌注免疫BALB/c小鼠产生了较高的抗体水平.结论 成功构建了pET28a(+)/BIB原核表达质粒及BIB原核表达工程菌,该工程菌可表达重组蛋白rBIB,且该重组蛋白具有良好的免疫反应性及免疫原性.