幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌的构建及表达特性研究

• 作者: 丁娜娜 周永君 李建春 李明远 杨靖 潘兴 王保宁 祝捷
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 幽门螺杆菌 表位 尿素酶 粘附素 工程菌
• 年，卷（期）: 2014,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 367-370
• 语种: 中文

摘要

目的 构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA [pET28a(+)/IBA]及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性.方法 通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IBA.经限制性内切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导人大肠杆菌BL21(DE3).该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIBA)的表达情况,以抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)特异卵黄抗体采用Western blot检测rIBA的抗原性.结果 构建的多表位原核表达质粒pET28a(+)/IBA双酶切和测序鉴定与设计序列100％一 致.工程菌经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量40×103左右有一条明显蛋白条带,Western blot显示有相应位置特异反应条带.结论 成功构建幽门螺杆菌多表位重组原核表达质粒pET28a(+)/IBA及相应原核表达工程菌,该工程菌表达的rlBA具有抗原性,表明该重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性.