幽门螺杆菌cag4蛋白的原核表达、纯化及鉴定

• 作者: 王文凯 谢立苹 邵世和 钟桥
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 幽门螺杆菌cag4蛋白 原核表达 纯化 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 347-351
• 分类号: R739.4
• 字数: 4779字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2011.04.014

摘要

目的:构建幽门螺杆菌cag4蛋白的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白.方法:利用PCR技术从幽门螺杆菌NCTC11637中克隆了cag4基因;经T-A克隆,酶切鉴定,构建了原核表达载体pET-28a-cag4;经测序鉴定正确后,转化进入大肠埃希菌 BL21(DE3)进行异源表达.利用IPTG体外诱导后,经SDS-PAGE和Western bolt鉴定目的蛋白表达后,采用Ni2+-NTA柱在变性条件下纯化目的蛋白,并对重组蛋白进行透析复性处理.将SDS煮沸法获得的溶壁微球菌肽聚糖掺入SDS-PAGE作为底物,进行酶谱分析.结果:成功扩增了cag4基因基因;重组质粒在大肠埃希菌 BL21(DE3)中诱导表达出pET-28a-cag4融合蛋白;优化了pET-28a-cag4原核表达体系的最适条件;Western bolt分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符;酶谱分析显示其具有明显的肽聚糖水解活性.结论:幽门螺杆菌cag4蛋白具有溶菌糖基转移酶活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵世和	江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室	99	382	9.0	14.0
2	王文凯	江苏大学附属人民医院检验科	6	38	3.0	6.0
3	钟桥	江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室	7	14	2.0	3.0
4	谢立苹	江苏大学基础医学与医学技术学院病原生物学研究室	4	11	2.0	3.0