人RASSF1A基因慢病毒表达载体的构建及鉴定

• 作者: 于媛 孔丽君 庞敏 胡金霞
• 来源期刊: 滨州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: RASSF1A基因 人 目的载体pLV.Des3d.P/neo 慢病毒
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 161-165,168
• 页数: 6页
• 分类号: R34
• 字数: 3374字
• 语种: 中文

摘要

目的 应用pLV.Des3d.P/neo 构建人RASSF1A 基因的慢病毒表达载体并对其进行鉴定.方法 采用Oligo核酸软件对Genbank上所发表的RASSF1A序列进行分析,设计一对RASSF1A 基因上下游引物,利用Gateway克隆方法,分别在其两端添加attB重组位点,运用PCR扩增RASSF1A 和IRES/eGFP,将PCR 产物进行BP 反应然后转化到Stbl3感受态菌,通过卡那霉素抗性筛选、PCR 鉴定,选取鉴定正确的pDown-RASSF1A 和pTail- IRES/eGFP 克隆测序.将pDown-RASSF1A和pTail-IRES/eGFP与pLV.EX3d.P/neo混合进行LR 反应,构建慢病毒载体pLV.EX3d.P/neo-EF1A＞RASSF1A＞IRES/eGFP,再次进行PCR、测序鉴定.结果 成功地构建了hRASSF1A基因的重组慢病毒表达载体pLV.EX3d.P/neo-EF1A＞RASSF1A＞IRES/eGFP.结论 基因序列克隆正确,为进一步探讨RASSF1A在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔丽君	滨州医学院山东省高校肿瘤分子生物学重点实验室生物化学与分子生物学教研室	30	70	5.0	7.0
2	胡金霞	滨州医学院山东省高校肿瘤分子生物学重点实验室生物化学与分子生物学教研室	23	47	4.0	6.0
3	于媛	滨州医学院山东省高校肿瘤分子生物学重点实验室生物化学与分子生物学教研室	21	67	5.0	7.0
4	庞敏	滨州医学院山东省高校肿瘤分子生物学重点实验室生物化学与分子生物学教研室	9	17	3.0	3.0