转基因水稻中重组人乳铁蛋白的分离纯化及其抑菌活性研究

• 作者: 刘改革 刘继开 吴景欢 宫照龙 朴建华 杨丽琛 沈志成 胡豫杰 郭云昌
• 来源期刊: 卫生研究
• 学科: 工学
• 关键词: 转基因水稻 重组人乳铁蛋白 分离提纯 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 399-404
• 分类号: TS201.6|TS207.4
• 语种: 中文

摘要

目的 研究从转基因水稻中分离纯化重组人乳铁蛋白(recombinant human lactoferrin,rhLF),并检测其是否具有抑菌活性.方法 通过饱和硫酸铵分级沉淀从转基因水稻中分离rhLF后,经CM Sepharose FF交换层析和Sephadex G25分子筛层析进一步纯化rhLF.采用微量肉汤稀释法检测不同浓度rhLF(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和5.00mg/ml)对鼠伤寒沙门菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特菌的抑制情况.结果 通过分离和纯化成功获得纯度较高的rhLF(纯度约90％),经考马斯亮蓝染色,Western blot和质谱仪鉴定分析确定为rhLF,分子量约为79 kD.抑菌实验显示,5.00和4.00mg/ml rhLF对鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌有持久的抑制效果,2.00和1.00mg/ml rhLF在实验后期也表现出明显的抑菌作用,0.50mg/ml及以下浓度则没有抑菌效果.5.00和4.00mg/ml rhLF在18h内对蜡样芽孢菌表现出一定的抑制效果；5.00mg/ml rhLF对单增李斯特菌在18h内有抑制作用.结论 从转基因水稻中可成功分离和纯化rhLF,纯化后蛋白仍具有明显的抑菌活性.