Hsa miR-7慢病毒表达载体的构建及其在人卵巢癌细胞HO8910-PM中表达的有效性

• 作者: 王文文 邱丽华
• 来源期刊: 国际生殖健康/计划生育杂志
• 关键词: 微小RNAs 慢病毒属 卵巢肿瘤 受体,血管内皮生长因子
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 87-90,110
• 页数: 5页
• 字数: 3966字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建Hsa miR-7的慢病毒表达载体,感染人卵巢癌细胞HO8910-PM后检测微小RNA 7(miR-7)及其靶基因血管内皮生长因子受体(EGFR)的表达,为研究miR-7在HO8910-PM中的生物学功能奠定基础.方法:将聚合酶链反应(PCR)扩增得到的miR-7前体序列pre-miR-7和慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1经酶切后连接产生pLVX-miR-7-IRES-ZsGreen1,经酶切及测序鉴定正确后在HEK293T细胞中包装病毒,病毒浓缩后感染HO8910-PM用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测感染后的HO8910-PM中pre-miR-7和miR-7的表达,qPCR及蛋白质印迹(Western blot)方法检测其靶基因EGFR的表达.结果:酶切及测序结果示慢病毒表达载体pLVX-miR-7-IRES-ZsGreen1构建正确,病毒浓缩液感染HO8910-PM后能有效提高pre-miR-7的表达(t=17.909,P=0.004)和miR-7的表达(t=35.320,P=0.024),并能有效降低其靶基因EGFR的mRNA的表达(t=8.83,P=0.005)及蛋白的表达(t=22.14,P=0.002).结论:成功构建了pLVX-miR-7-IRES-ZsGreen1慢病毒表达载体及稳定表达miR-7的HO8910-PM细胞亚系.