肿瘤型丙酮酸激酶的原核表达及单克隆抗体的制备

• 作者: 于华实 唐晓波 孙晓林 张天竹 李梅 李淑珍
• 来源期刊: 哈尔滨医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: TU M2-PK 原核表达 单克隆抗体 生物标记物
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 107-111
• 页数: 5页
• 分类号: R73-3
• 字数: 4892字
• 语种: 中文

摘要

目的 利用原核表达系统表达重组肿瘤型丙酮酸激酶(TU M2-PK),并制备TU M2-PK的单克隆抗体(mAb).方法 提取卵巢癌细胞株SKOV3的RNA,通过逆转录、PCR扩增TU M2-PK基因,将其分别与带有His标签的pET-32a及GST标签PGEX-4T-1载体连接,转化DH5α菌进行基因克隆并测序鉴定.进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达TU M2-PK融合蛋白(分别含有His、GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定.获得的蛋白经纯化后作为免疫原及检测原,进行杂交瘤细胞的筛选.采用间接ELISA法测小鼠血清及细胞上清TU M2-PK抗体效价,Western blot分析mAb特异性.结果 成功构建pET-32a-TU M2-PK、pGEX-4t-1-TU M2-PK工程质粒,获得两种标签的融合蛋白.将重组蛋白纯化后作为免疫原免疫小鼠,筛选获得两株稳定分泌TUM2-PK抗体的杂交瘤细胞株.分别命名为6A11、7C11,Western blot实验显示,两株均可以与重组蛋白特异性结合,并且能识别子宫颈癌细胞株(Hela)、胃腺癌细胞(SGC-7901)、肝癌细胞(HepG2)中的天然蛋白.结论 成功制备了TU M2-PK蛋白及其单克隆抗体,为进一步开发TU M2-PK诊断试剂打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐晓波	哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室	28	106	5.0	8.0
2	李梅	哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室	19	101	6.0	9.0
3	李淑珍	哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室	19	27	3.0	3.0
4	张天竹	哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室	4	11	2.0	3.0
5	孙晓林	哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室	3	8	2.0	2.0
6	于华实	哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室	3	9	2.0	3.0