牛乳腺炎无乳链球菌菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因的克隆及其表达产物的抗原性鉴定

• 作者: 刘洋 刘燕 吴金花 布日额 王学理 郭闯 锡林高娃
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 菌毛岛屿 AP1基因 克隆 抗原性
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 481-484,488
• 页数: 5页
• 分类号: R378.12
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆与高效表达无乳链球菌细胞表面菌毛岛屿辅助蛋白AP1基因编码蛋白抗原优势区,并进行抗原性分析及鉴定.方法 根据GenBank上公布的牛乳腺炎无乳链球菌辅助蛋白APl(EU929387.1)基因序列,利用生物信息学学软件Primer5.0和DNA MAN,根据其辅助蛋白保守序列设计、合成1对克隆引物,以分离于内蒙古东部地区乳源性无乳链球菌临床菌株总DNA为模板,PCR扩增辅助蛋白AP1基因序列,经克隆与测序后构建重组表达载体APl-pET30,转化大肠埃希菌BL21,并进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定.结果 克隆的抗原表位序列片段大小为714 bp,编码238氨基酸残基,与GenBank公布的APl(EU929387.1)基因序列相似性为99.72％,氨基酸残基相似性为99.58％.构建的重组表达载体经诱导表达可溶性蛋白,纯化后重组蛋白的纯度＞95％,Western blot分析重组蛋白能被牛源无乳链球菌阳性血清识别.结论 成功构建了pET-30a-AP1重组表达载体,该载体能可溶性表达重组蛋白,表达产物具有良好抗原反应性,为进一步研究辅助蛋白AP1的结构、功能以及抗原表位的鉴定奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	布日额		118	481	13.0	18.0
2	王学理		54	266	9.0	14.0
3	吴金花		41	213	8.0	13.0
4	刘洋		15	30	3.0	5.0
5	刘燕		18	25	3.0	4.0
6	锡林高娃		25	24	3.0	4.0
7	郭闯		19	94	6.0	9.0