毕赤酵母电转化方法的探索

• 作者: 万德有 刘蕴慧 华玲 杨小盼 董立厚 高新
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 毕赤酵母 电转化 转化效率
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 156-161
• 语种: 中文

摘要

旨在通过优化转化条件提高毕赤酵母电转化效率.采用不同的酵母细胞预处理液成分及浓度、不同的细胞体积、不同的质粒DNA用量,在不同的电压下进行转化,计数转化后在平板上产生的克隆数,通过计算每微克DNA获得的克隆数来评价转化效率.研究表明,用0.1 mol/L LiAc,0.01 mol/L DTT,0.6 mol/L sorbitol,0.01 mol/L Tris-HC1处理细胞可获得最佳转化效率;质粒DNA用量为10 ng时转化效率最高.使用0.1 cm电转杯,采用0.6 kV电压,对80μL细胞进行转化,转化效率最高,可达9.6×105/tg DNA;而使用0.2 cm电转杯,采用1.1 kV电压,对150 μL细胞进行转化,转化效率最高,可达8.8×105/μg DNA.采用优化后条件,用10μgpPIC9K质粒DNA转化GS115,可获得1.1×106个转化子.此外通过对3种常用毕赤酵母载体转化效率的比较,发现pPIC9K的转化效率约是pPICZαA的160倍,是pGAPZαA的2 900倍.采用优化后的转化条件,毕赤酵母的电转化效率从103-4提升到了106.采用单个电转杯最多可获得1.1×106个转化子.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高新	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室	25	142	7.0	10.0
2	董立厚	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室	6	14	1.0	3.0
3	刘蕴慧	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室	4	5	2.0	2.0
4	杨小盼	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室	2	2	1.0	1.0
5	万德有	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室	1	1	1.0	1.0
6	华玲	军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室	1	1	1.0	1.0