Fibulin-1蛋白的真核表达与ELISA检测方法的建立

• 作者: 傅斌生 刘炜 台艳 张剑文 张彤 张琪 杨扬 郑明慧 陈规划
• 来源期刊: 中华腔镜泌尿外科杂志（电子版）
• 关键词: Fibulin-1蛋白 真核表达 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 56-59
• 页数: 4页
• 字数: 2770字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3877/cma.j.issn.1674-3253.2013.06.017

摘要

目的 建立检测血清中Fibulin-1蛋白浓度的ELISA方法.方法 构建Fibulin-1蛋白真核表达载体,以人Fibulin-1基因编码序列为模板,将目的片段定向克隆入载体并转入毕赤酵母菌,进行Fibulin-1蛋白的真核表达.表达产物纯化后,Western blotting检测证明纯化的重组蛋白的抗原特异性.以该蛋白为定标绘制标准曲线,建立人血清ELISA检测方法并检测其精密度和回收率,最后初步分析人血清中Fibulin-1的含量.结果 从真核表达体系获得了纯化的Fibulin-1蛋白,其具有良好的抗原特异性;建立的ELISA方法线性相关系数R2=0.98,线性范围为12.5～800 ng/mL,检测灵敏度为6.25 ng/mL,蛋白回收率在94.33％～109.33％之间,CV均＜10％,具有良好的重复性;检测30例正常人血清样本中Fibulin-1的含量约为(31 ±8) μg/mL.结论 建立的ELISA方法可用于检测血清中的Fibulin-1蛋白含量.