甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-LAMP检测方法的建立

• 作者: 乔奇 张德胜 张振臣 王永江 王爽 田雨婷 秦艳红
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 甘薯 甘薯褪绿矮化病毒西非株系 逆转录环介导等温扩增技术 检测
• 年，卷（期）: 2013,（18）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 3939-3945
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.18.025

摘要

[目的]基于逆转录环介导等温扩增技术（ Reverse transcription loop-mediated isothermal amplification，RT-LAMP）建立甘薯褪绿矮化病毒（Sweetpotatochloroticstuntvirus，SPCSV）西非株系（West African，WA）的可视化检测方法。[方法]针对SPCSV西非株系（SPCSV-WA）的CP核苷酸序列设计4条引物，以感染SPCSV-WA甘薯叶片总RNA为模板，进行一步法RT-LAMP，在65℃条件下反应1 h。扩增产物利用琼脂糖电泳分析和 SYBR green I 荧光染料显色判断结果，同时对扩增产物的电泳条带进行基因克隆和测序鉴定。利用常规RT-PCR和建立的RT-LAMP方法对14份甘薯样品进行SPCSV-WA检测，比较2种方法的检测结果。[结果]建立的LAMP方法可特异地对SPCSV-WA进行检测，且最低可检测出101拷贝/μL的模板。RT-LAMP产物的克隆测序表明，感染SPCSV-WA甘薯样品的RT-LAMP产物为SPCSV-WA CP基因序列。14份田间甘薯样品检测表明，RT-LAMP与RT-PCR方法检测结果完全一致。[结论]建立的SPCSV-WA RT-LAMP可视化检测方法，是简便、可靠的SPCSV-WA检测方法。