人泛素启动子UbB介导Fat-1基因在绵羊成纤维细胞内的表达

• 作者: 周平 张银国 毛志福 王立民
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 人泛素启动子UbB Fat-1 表达载体 绵羊成纤维细胞 PUFAs
• 年，卷（期）: 2013,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 528-534
• 页数: 7页
• 分类号: S826.8.2
• 字数: 4106字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建不饱和脂肪酸脱氢酶基因Fat-1表达载体,实现人泛素启动子UbB调控外源基因Fat-1在绵羊细胞内表达.PCR扩增得到UbB序列,秀丽隐杆线虫Fat-1基因密码子根据绵羊对同义密码子使用偏好性优化后,由公司合成获得oFat-1基因序列,以及pcDNA3.1中的GBHpolyA序列共同插入pCMV-DsRed2-1载体的多克隆位点(MCS),得到重组真核表达载体pUbB-oFat-polyA-CMV-DsRed,载体序列经酶切测序鉴定.线性化的表达载体采用脂质体包裹后转染绵羊成纤维细胞,经G418抗性和红色荧光标记筛选得到阳性细胞,并对阳性细胞进行PCR和反转录PCR鉴定,HPLC检测细胞中不饱和脂肪酸的变化.构建的真核表达载体序列正确,Fat-1基因能够在绵羊成纤维细胞基因组中正常表达,促进细胞ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化,ω-3PUFAs占总量的百分比从11.48％增加到24.41％,ω-6PUFAs的百分比从88.52％下降到75.59％,ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比值从7.82±0.18下降到3.10±0.03,差异极显著(P＜0.01).成功构建了UbB启动子介导的Fat-1真核表达载体,筛选得到表达不饱和脂肪酸脱氢酶的绵羊细胞,为进一步制备转基因克隆绵羊奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张银国	石河子大学动物科技学院	22	102	5.0	10.0