hPARP1酶在杆状病毒/昆虫细胞中的高表达及快速纯化

• 作者: 周海燕 李秋萍 杨雪丽 金坚 马军 龚笑海
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: hPARP1 杆状病毒 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 生物技术方法
• 页码范围: 998-1005
• 语种: 中文

摘要

PARP1是动物细胞内的一种重要的DNA修复酶.近几年PARP1作为新型的抗癌靶点,受到广泛的关注.为了获得高活性的PA RP1,首先将hPARP1基因克隆到载体pFastBacTM1中,构建转移载体pFast-hPARP1；然后转化大肠杆菌Escherichia coli DH10Bac感受态细胞中.其次,通过位点特异性转座,将hPARP1基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建表达质粒Bacmid-hPARP1.最后,通过脂质体将表达质粒转染Sf9昆虫细胞.Western blotting和酶活测定法对hPARP1的表达和活性进行分析.采用3-氨基苯甲酰胺亲和层析柱对收获的昆虫细胞中表达的hPARP1酶进行纯化.Western blotting结果表明在昆虫细胞中hPARP1酶表达成功.经3-氨基苯甲酰胺亲和层析柱纯化后,Sf9昆虫细胞表达出的hPARP1酶的比活由0.051nmol/(min·μg)提高到了1.988 nmoi/(min·μg),而且每100mL的细胞中能够收获约3.2mg酶.实验结果为PARP1大规模生产和应用提供了可参考利用的技术.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金坚	江南大学医药学院	196	1025	16.0	22.0
2	李秋萍	江南大学医药学院	74	902	19.0	28.0
3	杨雪丽	江南大学医药学院	2	3	1.0	1.0
4	周海燕	江南大学医药学院	7	39	3.0	6.0
5	龚笑海	江南大学医药学院	7	5	1.0	2.0
6	马军	江南大学医药学院	3	4	1.0	2.0