鳜传染性脾肾坏死病毒 ORF093基因的克隆、表达及其重组蛋白的免疫原性分析

• 作者: 付小哲 吴淑勤 彭媛媛 李宁求 林强 石存斌 黄志斌
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鳜 传染性脾肾坏死病毒 ORF093 免疫原性
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 427-433
• 分类号: S941
• 字数: 4828字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2013.00427

摘要

从患传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosis virus, ISKNV)病的鳜体内获得 ORF093基因.采用 PCR 方法扩增 ISKNV ORF093基因全长,克隆入原核表达载体 pET32a(+), IPTG 诱导表达, Ni 柱纯化后,免疫新西兰大白兔制备兔抗重组093蛋白血清,免疫印记分析兔抗血清的特异性,中和实验和免疫保护实验分析重组093蛋白的免疫原性.结果显示: ISKNV 重组093蛋白可以在大肠杆菌中以包涵体形式存在;制备的兔抗血清可以特异性识别重组093蛋白,对 ISKNV 具有中和作用,可给鱼体提供至少10 d 的100%预防保护;重组093蛋白对ISKNV 的攻击具有保护作用,攻毒后15 d,093免疫组平均相对保护率为45.3%.结果说明重组093蛋白具有一定的免疫原性,可作为 ISKNV 候选疫苗抗原和治疗血清制备抗原.本研究通过中和实验及免疫保护实验对重组093蛋白的免疫原性进行分析,旨在为鳜 ISKNV 重组亚单位疫苗的研制奠定基础.