汉赛巴尔通体17-kDa蛋白的表达及间接ELISA方法的建立

• 作者: 常晨 李玉峰 程王琨 郑芳园 陈攀 马培培
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 巴尔通体 17-kDa蛋白 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1616-1621
• 页数: 6页
• 分类号: S852.64
• 字数: 5154字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2013.10.015

摘要

为探讨中国猪群中是否存在巴尔通体感染情况,作者将汉赛巴尔通体17-kDa蛋白基因按大肠杆菌密码子偏嗜性改造后进行全基因人工合成,然后将目的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-28a-17kDa,导入大肠杆菌BL21感受态细胞中,进行诱导表达,并用Ni-NTA纯化试剂进行纯化;纯化后的蛋白应用His单抗进行鉴定.以17-kDa蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立检测抗汉赛巴尔通体17-kDa蛋白抗体的间接ELISA方法.结果如下:抗原包被量0.4 μg·mL1,37℃包被2h后4℃过夜,1％BSA 37℃封闭3h,待检血清1∶100稀释后,37℃孵育1h,二抗1∶15 000稀释,37℃作用30 min,抗体临界值OD450nm≥0.392判为阳性,OD400nm≤0.332 6判为阴性,介于二者之间为可疑.建立的ELISA与猪嗜血支原体、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪口蹄疫病毒等感染血清无交叉反应,批间和批内重复性较好,对379份血清样品进行检测,抗体阳性检出率达51.72％.该方法可用于汉赛巴尔通体抗体检测和流行病学调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李玉峰	南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室	105	845	16.0	23.0
2	陈攀	南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室	5	11	3.0	3.0
3	郑芳园	南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室	4	11	3.0	3.0
4	程王琨	南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室	3	6	2.0	2.0
5	常晨	南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室	5	6	2.0	2.0
6	马培培	南京农业大学农业部动物细菌学重点开放实验室	2	6	2.0	2.0