转录靶向猪Jiv基因shRNA细胞株的建立及抗猪瘟病毒转基因猪的构建

• 作者: 何雷 刘伟 宁蓬勃 徐磊 曹伟伟 程敏 谭学超 郭抗抗 雷安民
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 猪瘟病毒 RNA干扰 慢病毒 转基因猪
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 170-178
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.01.020

摘要

[目的]构建转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的阳性细胞株,通过比较各细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果,筛选对猪瘟病毒增殖有明显抑制作用的细胞株,为抗猪瘟转基因猪的构建提供材料.[方法]研究设计了靶向猪Jiv基因的4个shRNA干扰片段,并构建插入干扰片段的慢病毒(P1、P2、P3、P4).将慢病毒分别转染PK-15细胞,阳性细胞接种猪瘟病毒后72h用实时荧光定量PCR检测猪瘟病毒RNA的量,以比较4种干扰细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果.将对猪瘟病毒增殖有较好干扰效果的P2慢病毒干扰载体转染猪胎儿成纤维细胞,获得稳定表达靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的猪胎儿成纤维细胞株,作为抗猪瘟病毒转基因猪构建的供体细胞,将细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中,获得体细胞核移植胚胎,移植入受体母猪输卵管中进行转基因猪构建,对获得的转基因猪进行外源基因的鉴定.[结果]获得了4株转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的PK-15细胞株,其中转入P2干扰载体的细胞株对猪瘟病毒的增殖有明显的抑制作用,将转入P2干扰载体的猪胎儿成纤维细胞株为核供体细胞通过体细胞核移植,获得经鉴定为外源基因插入阳性的转基因猪.[结论]细胞Jiv基因的表达对猪瘟病毒的增殖有一定的影响,筛选获得的一个干扰细胞株对猪瘟病毒的增殖有明显的干扰效果;通过体细胞核移植技术获得一头转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段(P2)的转基因猪.