卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达

• 作者: 刘振国 吉挺 沈杰 沈芳
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 卡尼鄂拉蜂 王浆腺 锌转运蛋白-7相似蛋白 基因克隆 抗体制备 差异表达
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 生理与生化
• 页码范围: 1117-1126
• 分类号: Q965
• 语种: 中文

摘要

[目的]本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况.[方法]运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因,进行生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273 bp)作为多肽免疫序列.将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21 (DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Westernblot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量.[结果]克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,大小为1 065 bp.SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶64000,且具有很高的特异性.ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄(P＜0.01),12日龄表达量最低,其他日龄间表达量两两差异显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01);ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致.[结论]成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量.这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吉挺	扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室	75	313	9.0	12.0
2	沈杰	扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室	17	61	5.0	7.0
3	刘振国	扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室	8	29	4.0	5.0
4	沈芳	扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室	8	29	4.0	5.0