十二指肠钩虫ASP-1成熟蛋白基因的克隆、原核表达及纯化

• 作者: 夏晓玲 孙炜
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 十二指肠钩虫 ASP-1成熟蛋白 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 144-147,154
• 页数: 5页
• 分类号: R383.13
• 语种: 中文

摘要

目的 获得十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)分泌蛋白1(mAd-ASP-1)编码基因全长并实现其原核表达. 方法 根据GenBank AAD13339公布的序列,设计并合成引物,RT-PCR扩增mAd-ASP-1的成熟肽全基因序列,测序后克隆至pET-22b(+)载体,转化大肠埃希菌,诱导表达Ad-ASP-1,亲和层析纯化. 结果 RT-PCR扩增获得了mAd-ASP-1基因全长,成功构建了原核表达质粒pET-22b-mAd-ASP-1,转化大肠埃希菌Rosetta-gami 2(DE3)菌株,经IPTG诱导,表达预期47 ku的重组蛋白Ad-ASP-1,且主要以可溶形式存在.利用His Trap HP亲和柱获得了纯化的重组蛋白Ad-ASP-1,确定纯化重组蛋白咪唑洗脱液最佳浓度为100 mmol/L.Western blot显示,该融合蛋白可被鼠抗His tag抗体识别. 结论 获得了mAd-ASP-1基因全长,并成功构建其原核表达体系,为获得大量Ad ASP-1基因工程产品奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙炜		27	43	4.0	5.0
2	夏晓玲		6	6	1.0	2.0