SA/hIL24双功能融合蛋白的制备及其生物学活性的鉴定

• 作者: 陈惜倩 高基民
• 来源期刊: 温州医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 白细胞介素24 链亲和素 融合蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 78-83
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 字数: 5023字
• 语种: 中文

摘要

目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素24融合蛋白(SA/hIL24),并鉴定其生物学活性.方法:通过RT-RCR扩增hIL-24基因序列,构建pET24a-SA-hIL24和pET21a-hIL24-SA重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,对表达的融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和凝胶过滤层析纯化、透析复性.MTT法检测融合蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析融合蛋白对已生物素化的小鼠膀胱癌MB49细胞的锚定修饰效率.结果:成功构建两种融合蛋白的重组表达质粒,在大肠杆菌中实现高效表达,表达量分别占菌体总蛋白的20％和35％,二次纯化后SA/hIL24融合蛋白纯度可达95％以上.SA/hIL24融合蛋白可高效结合至已生物素化的MB49肿瘤细胞表面(表面锚定修饰率大于90％),hIL24-SA融合蛋白可以剂量依赖的方式抑制Hela细胞的生长,而SA-hIL24融合蛋白对Hela细胞没有明显的抑制生长作用.结论:SA/hIL24融合蛋白的制备为hIL-24表面锚定修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高基民	温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室	17	32	3.0	4.0
2	陈惜倩	温州医学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室	2	5	2.0	2.0