凋亡诱导因子AIF基因真核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘蜀坤 张遵真 邓雯文
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 凋亡诱导因子 真核表达载体 TA克隆 转染
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 170-174
• 语种: 中文

摘要

目的 利用TA克隆法构建凋亡诱导因子(AIF)的真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),并研究其在人肺腺癌A549细胞中的表达.方法 根据GenBank上AIF的mRNA序列设计特异性引物,以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增AIF基因.并用TA克隆法,将AIF目的基因连接到pUC-T载体,行双酶切和DNA测序鉴定；回收目的片段并将其插入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建重组质粒AIF-pcDNA3.1(+).最后,将A IF-pcDNA3.1(+)转染A549细胞,RT-PCR和Western blot检测转染细胞AIF基因的表达.结果 成功扩增617 bp的AIF目的基因片段并连接pUC-T载体,测序后回收目的片段并与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,DNA序列分析显示,连接在真核表达载体上的基因片段与GenBank中的AIF序列完全吻合.RT-PCR和Western blot检测结果显示,转染了AIF-pcDNA3.1(+)的A549细胞AIF mRNA和蛋白表达水平均高于未转染细胞(P＜0.05).结论 成功构建了真核表达载体AIF-pcDNA3.1(+),转染后能够在A549细胞中表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张遵真	四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室	90	494	10.0	16.0
2	刘蜀坤	四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室	15	11	2.0	3.0
4	邓雯文	四川大学华西公共卫生学院环境卫生学教研室	9	12	2.0	3.0