重组质粒pVAX1-PENK大规模制备研究

• 作者: 卢育新 张庆林 柳伟 程晓晨 胡春生 蔡珍珍
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组质粒pVAX1-PENK 发酵 连续碱裂解 分离纯化
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 828-832
• 页数: 5页
• 分类号: Q502|Q78
• 字数: 3759字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.06.018

摘要

目的：建立质粒pVAX1-PENK的大规模制备工艺。方法：对大肠杆菌工程菌DH5α-pVAX1-PENK进行补料发酵，利用自行发明的连续碱裂解过程对菌体进行裂解，经超滤浓缩后，用Sepharose 6 Fast Flow层析柱分离DNA与RNA，再经Plasmidselect Xtra层析柱分离超螺旋质粒DNA与开环或线性质粒DNA，最后经Source 15Q层析柱精制质粒DNA。结果：发酵获得质粒pVAX1-PENK的产率为182 mg/L，经碱裂解及层析分离后，最终制备的质粒DNA超螺旋比例大于98%，总回收率为60.5%，纯度（D260nm/D280nm）为1.8~2.0。结论：建立的质粒DNA生产工艺可以制备大量高纯度的质粒DNA，并避免了使用动物源性的酶及有毒试剂。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡春生	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	3	9	2.0	3.0
5	卢育新	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	13	88	7.0	9.0
6	程晓晨	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	9	56	4.0	7.0
7	蔡珍珍	中南大学药学院	1	0	0.0	0.0
11	柳伟	军事医学科学院放射与辐射医学研究所	1	0	0.0	0.0