高效双价（Bt + cpti）表达载体的构建及其表达分析

• 作者: 周焘 孙国清 孟志刚 张桦 张锐 薛计雄 郭三堆
• 来源期刊: 中国农业科技导报
• 学科: 农学
• 关键词: 双价载体 高效 抗虫性 表达分析
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 91-97
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|S562
• 字数: 6133字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0864.2013.03.13

摘要

以已有的中间载体和表达载体为基础,对 Bt、cpti 基因进行了修饰。在 cpti 基因的5′端增加了大豆胰蛋白酶抑制剂 SKTI 信号肽序列,在3′端增加了内质网滞留信号肽 KDEL 序列,然后在 Bt 基因的5′端增加了叶绿体靶向肽序列,构建了带有信号肽的双价表达载体 PGBIC ( K). B.4A 和不含信号肽的对照载体PGBIC. B.4A。通过农杆菌介导的喷花法转化陆地棉 Y18,Southern 杂交结果显示,外源基因已经整合到了受体植物基因组中；ELISA 结果显示,所获得的5株阳性株蛋白表达量分别提高了1~8倍不等。在杀虫实验中,修饰的双价载体的转基因植株1/4-1由于蛋白表达量的积累而显示了较高的棉铃虫抗性。为获得更高抗性的双价转基因抗虫棉提供了一种新的方法,并为基因工程中提高外源蛋白积累量的研究。