酮古龙酸菌山梨醇脱氢酶的原核表达及活性检测

• 作者: 夏焕章 张惟材 汪建华 熊向华 葛欣 赵楠
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 酮古龙酸菌 山梨醇脱氢酶 原核表达 生物活性 活性电泳
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 810-813
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3505字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.06.013

摘要

目的：克隆酮古龙酸菌Y25的山梨醇脱氢酶基因sldh，在大肠杆菌中进行表达并检测表达产物的活性。方法：以酮古龙酸菌Y25基因组DNA为模板，PCR扩增sldh基因，连接到表达载体pTIG，转入大肠杆菌BL21（DE3）， IPTG诱导表达；取表达菌体、菌体裂解上清和沉淀进行SDS-PAGE分析；以山梨醇为底物，通过活性电泳、体外转化及休止细胞转化进行sldh基因表达产物的活性检测。结果：扩增得到1740 bp的山梨醇脱氢酶基因，构建了表达质粒pTIG-sldh并在大肠杆菌中获得表达，SDS-PAGE结果显示表达产物为可溶性形式，相对分子质量约58×103；活性电泳结果说明表达产物在以山梨醇为底物时表现出脱氢酶活性，而经体外转化和休止细胞转化后薄层层析检测出转化产物山梨糖的存在。结论：在大肠杆菌中实现了酮古龙酸菌山梨醇脱氢酶的可溶性表达，且表达的重组脱氢酶能将山梨醇脱氢生成山梨糖。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏焕章		44	298	10.0	16.0
2	熊向华	军事医学科学院生物工程研究所	46	135	6.0	9.0
3	汪建华	军事医学科学院生物工程研究所	46	163	6.0	10.0
4	张惟材	军事医学科学院生物工程研究所	75	603	13.0	22.0
5	赵楠	军事医学科学院生物工程研究所	27	144	7.0	11.0
9	葛欣	军事医学科学院生物工程研究所	7	23	3.0	4.0