原文服务方: 北京大学学报医学版       
摘要:
目的:从自然界中分离鉴定产3α-羟类固醇脱氢酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达3α-HSD.方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定.为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的3α-HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21(DE3)pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力.结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为85%,最适生长pH值为7.0,最佳生长温度为30 ℃.在E.coli. BL21(DE3)pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为29×103 具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α-羟类固醇)脱氢.结论:从池塘泥浆中分离到一株产3α-HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合3α-HSD.这为利用金属螯和亲和层析纯化融合3α-HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础.
推荐文章
重组大肠杆菌表达17β-羟基类固醇脱氢酶全细胞催化合成宝丹酮的研究
17β-羟基类固醇脱氢酶
1,4-雄烯二酮
宝丹酮
生物催化
睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD的研究进展
睾丸酮丛毛单胞菌
3α-HSD
研究进展
胆固醇-7,8-脱氢酶大肠杆菌工程菌的构建
cDNA文库
重组大肠杆菌
胆固醇-7,8-脱氢酶
内容分析
关键词云
关键词热度
相关文献总数  
(/次)
(/年)
文献信息
篇名 睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达
来源期刊 北京大学学报医学版 学科
关键词 睾丸酮丛毛单胞菌 3-α-羟类固醇脱氢酶 聚合酶链反应 胆汁酸
年,卷(期) 2005,(2) 所属期刊栏目 技术方法
研究方向 页码范围 203-206
页数 4页 分类号 R446
字数 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:1671-167X.2005.02.023
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 徐国宾 北京大学第一医院检验科 130 2817 24.0 49.0
2 夏铁安 北京大学第一医院检验科 50 1046 17.0 31.0
3 张国华 北京大学第一医院检验科 9 156 7.0 9.0
4 孙立颖 北京大学第一医院检验科 36 222 9.0 13.0
5 严岩 北京大学第一医院检验科 16 150 7.0 12.0
6 丛爱日 2 18 2.0 2.0
传播情况
(/次)
(/年)
引文网络
引文网络
二级参考文献  (1)
共引文献  (6)
参考文献  (6)
节点文献
引证文献  (7)
同被引文献  (8)
二级引证文献  (3)
1952(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
1965(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
1981(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
1982(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
1997(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
1998(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
2002(1)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(0)
2005(0)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(0)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(0)
2006(1)
  • 引证文献(1)
  • 二级引证文献(0)
2007(1)
  • 引证文献(1)
  • 二级引证文献(0)
2009(2)
  • 引证文献(2)
  • 二级引证文献(0)
2011(1)
  • 引证文献(1)
  • 二级引证文献(0)
2013(2)
  • 引证文献(1)
  • 二级引证文献(1)
2014(3)
  • 引证文献(1)
  • 二级引证文献(2)
研究主题发展历程
节点文献
睾丸酮丛毛单胞菌
3-α-羟类固醇脱氢酶
聚合酶链反应
胆汁酸
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
北京大学学报医学版
双月刊
1671-167X
11-4691/R
大16开
1959-01-01
chi
出版文献量(篇)
3297
总下载数(次)
0
论文1v1指导