睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996类固醇脱氢酶3α-HSD的高效表达与纯化

• 作者: 何田田 冯叙桥 孙芳芳 肖琳 薛强 邹明强 韦娜
• 来源期刊: 中国农业大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 睾丸酮丛毛单胞菌 3α-HSD 诱导表达 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 页码范围: 142-146
• 分类号: R446.1
• 语种: 中文

摘要

利用分子克隆的方法扩增与克隆睾丸酮丛毛单胞菌ATCC 11996的3α-HSD基因,构建以pET-15b为载体的表达工程菌,IPTG诱导蛋白表达,通过优化表达菌的最佳表达条件得到最大表达量的目的蛋白.诱导后将工程菌裂解,通过硫酸铵沉淀,Ni-NTA亲和层析,分子筛分离进行纯化,并测定纯化后蛋白的酶活性.结果表明:1)克隆获得了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因并实现了异源表达；2)工程菌的最佳表达条件为:37℃培养,0.6mmol/L IPTG诱导4h,培养基中Zn2+终浓度为0.1 mmol/L；3)表达工程菌裂解后用60％硫酸铵沉淀,亲和层析和分子筛分离后得到了纯度高达99％的目的蛋白,纯化后的蛋白保持酶活性.本试验成功克隆表达了睾丸酮丛毛单胞菌3α-HSD基因,建立了3α-HSD的高效表达与纯化方法,为相应抗体的制备与水资源中的类固醇激素检测方法的建立提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邹明强		87	1096	16.0	30.0
2	冯叙桥	沈阳农业大学食品学院	59	761	13.0	25.0
3	薛强		29	131	8.0	10.0
4	孙芳芳		2	12	2.0	2.0
5	肖琳	沈阳农业大学食品学院	2	15	2.0	2.0
9	韦娜	沈阳农业大学食品学院	3	44	3.0	3.0
13	何田田		2	4	1.0	2.0