睾丸酮丛毛单胞菌活化因子基因的质粒载体构建及表达

• 作者: Guangming Xiong 吴明霞 周以飞 戴艺民 潘大仁
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 睾丸酮丛毛单胞菌 活化因子 3α-羟基类固醇脱氢酶/碳酰基还原酶 基因表达
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 416-422
• 页数: 7页
• 分类号: S188
• 字数: 3996字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2006.03.023

摘要

提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)的基因组DNA,利用PCR扩增activator基因,将扩增产物克隆到pKtac1(含强启动子tac)中,构建重组质粒pKtac1-act1和pKtac1-act2.经酶切分析和测序,鉴定出正确的重组质粒pKtac1-act1和pKtac1-act2.将重组质粒转化入大肠杆菌(Eschericbia coli)HB101中,用酶联免疫分析方法测定细菌总蛋白质中的activator表达量;将pAX1(含3α-HSD/CR基因)分别和重组质粒(pKtac1-act1和pKtac1-act2)一起转化入E. coli HB101中,测定细菌总蛋白质中的3α-HSD/CR和activator的表达量.结果表明:重组质粒能明显提高activator的表达;pAX1与重组质粒共转化的蛋白质粗提物中,activator和3α-HSD/CR的表达量都显著提高.