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摘要:
提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)的基因组DNA,利用PCR扩增活化因子(activator)基因.将扩增产物克隆到pKtac1(含强启动子tac)中,构建含全长activator基因(564bp)的重组质粒pKtac1-act1和含部分activator基因(409bp)的pKtac1-act2.测序结果发现重组质粒pKtac1-act2的tac启动子-10保守区由TATAAT突变为TATGTT.将pKtac1-act1和pKtac1-act2分别进行酶切和连接,获得重组质粒pKtac1-act3(含启动子-10保守区为TATAAT,409 bp的部分activator基因)和pKtac1-act4(含启动子-10保守区为TATGTT,564 bp的全长activator基因).将4个重组质粒分别转化入宿主菌Escherichia coli HB101中,用酶联免疫分析方法测定细菌总蛋白质中的activator表达量;将pAX1(含3α-hsd/CR基因)分别和4个重组质粒一起转化入宿主菌E.coliHB101中,测定细菌总蛋白质中的3α-hsd/CR和activator的表达量.结果表明:启动子-10保守区为TATAAT的质粒比-10保守区为TATGTT的质粒有更高的转录活性;过量的actvitor表达可能影响质粒pKtac1-act3表达的稳定性;启动子-10区保守序列的下降突变(pKtac1-act2,TATAAT→TATGTT)及tac启动子的丢失(pKtac1-act3,继代培养4次)揭示了宿主菌E. coli HB101的自身防护机制.
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文献信息
篇名 不同-10区保守序列的tac启动子表达睾丸酮丛毛单胞菌中的活化因子
来源期刊 农业生物技术学报 学科 农学
关键词 tac启动子 -10区保守序列 睾丸酮丛毛单胞菌 活化因子 基因表达
年,卷(期) 2005,(6) 所属期刊栏目 研究论文
研究方向 页码范围 747-753
页数 7页 分类号 S8
字数 4834字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1674-7968.2005.06.012
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1993
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