piggyBac转座子介导的牛A-FABP表达载体的构建与鉴定

• 作者: 付常振 成功 昝林森 李耀坤 杨宁
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: piggyBac转座子 A-FABP基因 表达载体 牛成纤维细胞
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 8-14,20
• 页数: 8页
• 分类号: S823.2
• 字数: 4574字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建以piggyBac (PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,Neomycin (NEO)为抗性基因,alpha-肌动蛋白(α-actin)为启动子的A-FABP基因特异性表达载体pPB-AFABP,并验证其转座活性.[方法]通过PCR方法合成PB转座子骨架序列、NEO-EGFP、α-actin启动子以及A-FABP基因序列,并将各个序列连接构建成转基因载体pPB-AFABP;用脂质体法将供体质粒pPB-AFABP和辅助质粒pCAG-PBase组成的PB二元系统及质粒pPB-AFABP分别转染牛成纤维细胞,通过G418筛选得到转基因细胞.[结果]经过酶切和测序鉴定,载体pPB-AFABP构建正确；PB二元系统的阳性克隆数明显多于转座子载体pPB-AFABP的克隆数；PCR鉴定结果表明,牛成纤维细胞中存在目的基因A-FABP.[结论]成功构建了转基因表达载体pPB-AFABP,且证实PB转座子在牛成纤维细胞中具有较高的转座活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成功	西北农林科技大学动物科技学院	7	10	2.0	2.0
2	付常振	西北农林科技大学动物科技学院	7	30	3.0	5.0
3	杨宁	西北农林科技大学动物科技学院	9	45	3.0	6.0
4	李耀坤	西北农林科技大学动物科技学院	2	6	2.0	2.0