一种植物双基因共表达载体的构建及应用

• 作者: 安泽伟 李维国 李雅超 翟琪麟 谢黎黎 赵建文 黄华孙
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: 植物表达载体 共表达 多基因 Basta
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 研究资源
• 页码范围: 612-620
• 页数: 9页
• 字数: 6018字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2013.05.014

摘要

多基因共转化有利于对植物复杂性状进行改良.本研究通过在pXCS-HAStrep质粒中引入一段间隔序列,构建了双基因共表达载体pXCS-Dgene-HAStrep,实现了在一套表达盒内独立表达两个基因,并将克隆自橡胶树(Hevea brasiliensis)的Hb WRKY11和Hb WRKY7基因克隆入该载体,利用农杆菌(Agrobacterium tumefacien)介导法将构建好的共表达载体pXCS-HbWRKY1 1-Hb WRKY7-HAStrep转入野生型拟南芥(Arabidopsis thaliana),共获得了84株抗Basta除草剂的拟南芥转基因植株.对随机选择的8株转基因植株进行半定量和荧光定量PCR分析表明,Hb WRKY11和HbWRKY7基因能同时独立表达,Hb WRKY7的表达量略高于Hb WRKY11,但差异不显著(Pr=0.4867＞0.05);而在不同的转基因植株间,基因的表达差异显著,其中单拷贝的转基因株系S2和S5表达量最高.对双基因共表达株系S2和S5及Hb WRKY11和Hb WRKY7的单基因转基因株系L3、L4、J1和J5进行低温和茉莉酸胁迫处理,结果表明,冷应答基因AtCOR47和茉莉酸应答基因AtCO11及可溶性糖含量在双基因共表达株系中的变化特征与其在单基因转基因株系中的变化特征均表现出明显的差异.实验证明,本研究所构建的双基因共表达载体可以在植物转化中实现一个表达框内独立表达两个基因.