辐射诱导人TRAIL和内皮抑素双基因共表达载体的构建及鉴定

• 作者: 刘扬 李艳博 梁硕 王剑锋 王宏芳 郭彩霞 龚守良 龚平生
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 内皮抑素 辐射 Egr-1启动子
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 1007-1011
• 分类号: Q691|R730.55
• 语种: 中文

摘要

目的 构建辐射敏感Egr-1启动子诱导分泌型人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和内皮抑素(endostatin)双基因共表达的载体pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES.方法 利用聚合酶链式反应(PCR)方法从pMD19T-endostatin载体上扩增得到分泌型endostatin基因,并连接到pMD19T载体上进行测序,然后利用基因重组技术构建Egr-1启动子转录调控分泌型TRAIL和endostatin双基因表达的重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES.结果 PCR扩增出的650 bp片段经测序证实其序列与预期一致,说明获得的分泌型人endostatin基因正确;对pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES及其构建过程中涉及到的多种中间载体进行PCR和酶切鉴定,结果均与预期完全一致,证实含有辐射敏感Egr-1启动子的分泌型TRAIL和endostatin双基因共表达重组质粒pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES构建正确.结论 成功构建了辐射诱导表达的双基因共表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL-shES,为探讨TRAIL和endostatin双基因-放射治疗的抗肿瘤作用及其机制奠定了实验基础.