缺刻缘绿藻二酰甘油酰基转移酶2(DGAT2)的基因特性与功能鉴定

• 作者: 吴洪 周志刚 房逢立
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 缺刻缘绿藻 酿酒酵母 二酰甘油酰基转移酶(DGAT) 三酰甘油(TAG) 油滴
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 页码范围: 1162-1172
• 分类号: Q781|S917.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2013.38654

摘要

酰基-CoA—二酰甘油酰基转移酶(DGAT)是微藻等植物三酰甘油(TAG)合成过程中的关键酶.为了解析缺刻缘绿藻TAG合成代谢的途径,在该藻转录组测序数据库中,通过同源搜索,发现了1个编码DGAT2的cDNA全长序列.该序列长1 997 bp,其中5'-非翻译区(UTR)长44 bp,3 '-UTR长897 bp,开放阅读框(ORF)长1 056 bp,编码1个含有351个氨基酸的蛋白质,预测的分子量为39.43 ku,等电点为9.46.基于缺刻缘绿藻和其他物种相应的DGAT基因编码蛋白序列所构建的Neighbor-Joining(NJ)系统进化树,结果表明该基因与DGAT2聚成一支,显著不同于DGAT1和DGAT3.氨基酸序列比对发现,该基因编码产物含有DGAT2所具有的HPHG这4个氨基酸所组成的高度保守特征序列.因此,将该基因命名为MiDGAT2.将它的cDNA与其DNA序列进行比较后发现,MiDGAT2含有6个内含子,其剪接位点均符合“GT-AG”规则.为进一步了解其功能,利用反转录PCR克隆了该基因的ORF序列,然后将其亚克隆到表达载体pYES2中,成功地构建了重组表达质粒pY-MiDGAT2.通过电穿孔法将该重组质粒转入酿酒酵母TAG合成缺陷株H1246中,经筛选与序列验证得到含有重组质粒pY-MiDGAT2的酵母转化株.酵母转化株在用SC培养基并加入半乳糖诱导表达培养后,其脂类的薄层色谱分析结果表明,所转的MiDGAT2基因能使酵母转化株恢复TAG合成的能力,从而证实了MiDGAT2基因具有DGAT的功能；利用荧光染料Bodipy对酵母细胞的染色结果显示,MiDGAT2基因能使酵母转化株的细胞重现油滴,尽管重建的油滴大小明显比野生型酵母的小.

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序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴洪		7	89	3.0	7.0