人尿激酶型纤溶酶原激活因子截短型突变体与绿色荧光蛋白在真核细胞HEK293F中的融合表达

• 作者: 张昕 张连成 李伊培 潘芸 胡显文 陈惠鹏 高丽华 高招刚
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 尿激酶型纤溶酶原激活因子 绿色荧光蛋白 真核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 页码范围: 320-324
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4679字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.03.004

摘要

目的：构建人尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）截短型突变体与绿色荧光蛋白（EGFP）分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达。方法：采用PCR法，分别以质粒pIRES2-EGFP和重组质粒pcDNA3.1（+）/uPA为模板，扩增出带BamHⅠ和XbaⅠ酶切位点的EGFP及带NheⅠ和HindⅢ酶切位点的uPA截短体基因片段，先后将EGFP和截短型uPA基因片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1（+）上，转入HEK293F细胞，用G418对转染细胞进行加压筛选，通过共聚焦显微镜观察和ELISA方法鉴定表达产物。结果：DNA测序结果显示，uPA不同截短型突变体基因片段与EGFP基因融合的真核表达载体构建成功，共聚焦显微镜观察发现HEK293F细胞中有绿色荧光且定位于细胞质中，ELISA检测到HEK293F细胞培养上清中分泌型融合蛋白的表达。结论：构建了uPA截短型突变体与EGFP分泌型融合表达载体并在真核细胞中表达，为后期研究uPA的相互作用蛋白及其生理功能奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈惠鹏	军事医学科学院生物工程研究所	143	885	15.0	23.0
2	高丽华	军事医学科学院生物工程研究所	37	174	7.0	12.0
3	胡显文	军事医学科学院生物工程研究所	67	596	13.0	22.0
4	潘芸	安徽大学生命科学学院	3	4	1.0	1.0
5	高招刚	安徽大学生命科学学院	3	4	1.0	1.0
6	张连成	军事医学科学院生物工程研究所	6	6	2.0	2.0
7	张昕	安徽大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0
8	李伊培	沈阳药科大学生命科学学院	2	3	1.0	1.0