硫酸化胆汁酸水解酶基因BSS H1克隆、表达及活性

• 作者: 李永生 洪琳 胡琳 陈建敏 高秀峰
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 铜绿假单胞菌 硫酸化胆汁酸水解酶 胆汁酸检测 原核表达 立体异构反应
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 876-880
• 页数: 5页
• 分类号: Q789
• 字数: 2632字
• 语种: 中文

摘要

目的 从铜绿假单胞菌克隆出硫酸化胆汁酸水解酶(BSS)基因,并表达蛋白产物、研究其活性.方法 通过序列比对确定铜绿假单胞菌中的目的序列BSS H1；通过PCR扩增获得BSS H1基冈全序列,将其插入pET30b(+)载体,并将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.通过优化诱导表达条件,实现重组蛋白BSS H1的高效表达；通过BSS-HSD酶联法初步研究其酶活性质.结果 工程菌扩大培养3h、以终浓度为1 mmol/L IPTG诱导5h时蛋白表达量最高；研究发现BSS H1能催化底物生成3α和3β两种构型的羟基胆汁酸,在pH 8.5时,其活性分别是(632±65) U/L和(52±4) U/L.结论 成功构建BSS H1高效表达菌株.BSS H1能催化生成两种立体异构体的特性在其他BSS中未见报道,其机制尚不明确,值得深入研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李永生	四川大学化学工程学院化学工程系	75	302	9.0	13.0
2	高秀峰	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学教研室	51	202	7.0	11.0
3	胡琳	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学教研室	20	99	5.0	9.0
4	洪琳	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学教研室	2	7	1.0	2.0
5	陈建敏	四川大学华西基础医学与法医学院生物化学教研室	1	0	0.0	0.0