细菌 blaNDM-1基因 PCR 检测方法的建立及应用

• 作者: 丘婷 吕殿红 周秀蓉 温肖会 翟少伦 袁洁 贾春玲 魏文康 黄忠
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: blaNDM-1 基因 耐药细菌 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2013,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 145-148,149
• 页数: 5页
• 分类号: S852.6|R915
• 字数: 3875字
• 语种: 中文

摘要

为了调查养殖场和农贸市场中的耐药细菌是否携带 blaNDM-1基因，根据 GenBank 已公布的blaNDM-1基因序列设计 PCR 引物，优化 PCR 反应体系和反应条件，建立了 blaNDM-1基因的 PCR 检测方法，以人工合成的 blaNDM-1基因作为阳性质控品，以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌和铜绿假单胞菌等4株标准菌株为阴性对照，验证耐药细菌 blaNDM-1基因 PCR 检测方法的特异性、敏感性、重复性，并对229株大肠埃希菌分离株和31株链球菌分离株进行检测。结果表明，blaNDM-1基因 PCR 检测方法的特异性、敏感性、重复性试验均成立，该方法扩增的目的基因片段为241 bp，能检出的最小基因组 DNA 浓度为9．18×10-7μg/μL；229株大肠埃希菌分离株和31株链球菌分离株 blaNDM-1基因 PCR 检测结果均没有出现目的条带，表明从广东省部分地区分离到的细菌分离株中没有携带 blaNDM-1基因。该方法可作为耐药细菌 blaNDM-1基因的早期检测、快速筛查手段在兽医临床耐药细菌检测中应用。