肠道病毒71型的全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定

• 作者: 叶飞 彭小忠 王冠洲 赵阿妮 阴彬 韩为
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠道病毒71型 感染性克隆 一步生长曲线
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 840-844
• 页数: 5页
• 分类号: Q939.47
• 字数: 2426字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克隆并验证感染性.方法 用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,装入pBR322载体.将该克隆线性化,体外转录后转染RD细胞后,通过观察CPE及RT-PCR验证其感染性.随后利用空斑法测定拯救病毒的一步生长曲线.结果 成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆；体外转录及转染RD细胞60 h后可观察到明显的CPE现象；RT-PCR在转染RD细胞中检测到病毒的存在；成功利用空斑法测定了拯救病毒的一步生长曲线,最大滴度达到2×107 pfu/mL.结论 成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆并验证了其感染性,同时测定了拯救病毒的一步生长曲线,与野生型病毒相近.