口蹄疫病毒O型OHM/02株全长cDNA感染性克隆的构建

• 作者: 易忠 汪萍 王延 米晓云 苗书魁 薛英 马文戈 魏婕 魏玉荣 黄炯
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 全长cDNA 转染 病毒拯救
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 4494字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2018.01.001

摘要

为构建O型口蹄疫病毒(FMDV)的感染性克隆,采用 RT-PCR将 O型 FMDV OHM/02株全长基因组分为5个重叠的片段进行扩增,克隆至载体 pUC57中,获得全长 cDNA克隆 pPO-1.将线性化的pPO-1与含有编码 T7 RNA 聚合酶的真核表达重组质粒共转染 BHK-21细胞,出现致细胞病变效应(CPE).对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切、测序,表明人工设计的分子标记B am HⅠ酶切位点消失,排除了亲本毒株污染的可能性.间接免疫荧光试验可以检测到绿色荧光,电镜观察可观察到病毒粒子,表明构建了具有感染性的 OHM/02毒株全长 cDNA克隆.病毒生长曲线表明,拯救病毒与亲本病毒的复制能力和增殖特性相似.OHM/02株全长 cDNA感染性克隆的构建及拯救可为FMDV致病机理的研究提供一种重要工具,可促进疫苗的研发.