多重Taqman探针实时RT-PCR检测手足口病病原体方法的建立及临床应用

• 作者: 张其华 胡正 钟天鹰 陈倩
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 手足口病 肠道病毒A型,人 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 845-849
• 页数: 5页
• 字数: 3742字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2013.09.016

摘要

目的 建立多重Taqman探针实时RT-PCR法同步检测肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A16型(CA16)和包括EV71、CA16的肠道病毒通用型(EV).方法 回顾性研究.根据EV71、CA16和EV的保守序列,设计并合成相应的引物和探针,对该体系进行灵敏度、特异性和重复性验证.收集2012年4至7月南京医科大学附属南京儿童医院收治的176例疑似手足口病患儿咽拭子标本作为实验组,另收集10名在此期间到我院体检的健康儿童、10例门诊流感样患儿和90例我院呼吸科收治的呼吸系统疾病患儿咽拭子标本作为对照组.应用该方法对以上286份标本进行EV71/CA16/EV的同步检测.应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析.结果 该方法EV71、CA16和EV3个通道的检测限均为1.0×103拷贝/ml；对9株肠道病毒和3株非肠道病毒毒株核酸的检测结果均正确,特异度100％；对1.0×103拷贝/ml、1.0× 104拷贝/ml、1.0×105拷贝/ml的重组质粒进行重复性实验,其变异系数分别为0.44％ ～ 1.04％,0.38％～0.73％,0.46％ ～0.90％；运用多重Taqman探针实时RT-PCR法与实时RT-PCR法对176例疑似手足口病患儿临床标本进行检测和结果比对,两种方法的一致性为97.2％ (171/176),Kappa=0.94.结论 建立了同步检测EV71/CA16/EV的多重Taqman探针实时RT-PCR法,该方法灵敏度高,特异性好,可为临床快速诊断EV71、CA16和EV感染提供依据,有较强的临床及科研应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟天鹰	南京市妇幼保健院检验科	1	11	1.0	1.0