表达抗G250人源性抗体增殖缺陷型腺病毒的构建

• 作者: 刘俊杰 方琳 李望 程乾 郑骏年
• 来源期刊: 徐州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肾肿瘤 G250 抗体 增殖缺陷型腺病毒 重组腺病毒
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 肿痛学
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3254字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒.方法 通过重叠延伸PCR、常规PCR方法,分别获得G250重链的可变区和恒定区(GH)cDNA序列及G250轻链(GL) cDNA序列,并克隆至pCLON12-IRES载体上,构建质粒pCLON12-GL-IRES-GH.酶切质粒pCLON12-GL-IRES-GH回收GL-IRES-GH片段,克隆至腺病毒载体pDC315,构建pDC315-GL-IRES-GH(pDC315-G250).将pDC315-G250与腺病毒包装骨架质粒pBHGE3共转染HEK293细胞,重组包装表达G250抗体的增殖缺陷型腺病毒AdDC315-G250.纯化病毒表达的G250抗体,免疫印迹实验检测该抗体能否与细胞表面抗原特异性结合.结果 PCR及测序结果表明成功构建质粒pCLON12-GL-IRES-GH及腺病毒穿梭质粒pDC315-G250.PCR鉴定表明重组腺病毒AdDC315-G250含有目的 基因,病毒包装成功.免疫印迹实验结果显示,纯化的抗体在G250抗原阳性的细胞中能检测到目的 条带.结论 成功构建表达抗G250人源性抗体的增殖缺陷型腺病毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑骏年	徐州医学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室	114	335	9.0	11.0
2	李望	徐州医学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室	59	163	7.0	8.0
3	程乾	徐州医学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室	8	11	2.0	3.0
4	刘俊杰	徐州医学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室	31	88	5.0	7.0
5	方琳	徐州医学院江苏省肿瘤生物治疗重点实验室	3	2	1.0	1.0