用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞中持续稳定高表达

• 作者: 叶频 李国萍 李跃敏 范艳 邹智荣 陈绍春
• 来源期刊: 昆明医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 慢病毒载体 Gnaq基因 SH-SY5Y细胞 过表达
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2994字
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在人神经母细胞瘤株SH-SY5Y中持续稳定高表达的可行性,为深入研究Gnaq在脑衰老及相关疾病中的作用及分子机制奠定基础.方法 通过NCBI网站查询Gnaq的编码序列并设计相应的克隆引物,以高表达Gnaq的HepG2细胞的cDNA为模板,PCR扩增得到带适宜酶切位点的目的基因,将目的基因连接入慢病毒载体PLIG,转染感受态细胞,筛选阳性克隆,测序鉴定后包装慢病毒,转染SH-SY5Y细胞；于转染后24 h、第5代时检测GFP荧光表达率；检测第3代、第5代PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq的转录水平.结果 荧光检测显示SH-SY5Y细胞的转染效率接近100％,此表达效率可持续至转染后第5代；RT-PCR检测显示转染后第3代、第5代的PLIG-Gnaq-SH-SY5Y细胞内Gnaq呈明显的高转录水平,未明显受冻存的影响.结论 利用慢病毒转染技术实现Gnaq基因在SH-SY5Y细胞内长期稳定高表达具有可行性,可用PLIG-Gnaq-SH-SY5Y作为模型细胞深入研究Gnaq基因在神经细胞中扮演的角色及相关机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶频	昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系	14	68	4.0	8.0
2	陈绍春	昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系	22	56	5.0	7.0
3	范艳	昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系	9	21	3.0	4.0
4	李跃敏	昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系	5	14	3.0	3.0
5	邹智荣	昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系	12	73	5.0	8.0
6	李国萍	第三附属医院头颈外科	1	1	1.0	1.0