慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞系建立

• 作者: 孙金波 李严霜 边卫 边红 陈雯
• 来源期刊: 中国现代医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 阿尔茨海默病 慢病毒属 RNA干扰 糖原合成激酶-3β
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 14-18
• 页数: 5页
• 分类号: R749.1
• 字数: 3894字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建靶向糖原合成激酶3 β(GSK-3 β)基因的RNA干扰慢病毒载体,建立其对GSK-3 β基因沉默表达的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的细胞系模型.方法 根据GSK-3 β mRNA序列设计合成靶向目的基因的短发夹状RNA(shRNA)序列并构建慢病毒表达载体,经酶切和测序鉴定,将慢病毒重组载体与包装载体共转染293T细胞,获得纯化浓缩病毒液,侵染SH-SY5Y细胞,采用绿色荧光示踪观察细胞的转染情况,设为慢病毒干扰组(实验组)、阴性对照组(Lenti-NC组)、空白对照组(Blank组),利用qRT-PCR和Western blot法检测GSK-3β mRNA和蛋白表达水平.结果 成功构建了靶向GSK-3β的shRNA慢病毒,重组慢病毒转染人SH-SY5Y细胞,72 h后观察转染效率达90％以上,与对照组比较,靶基因变化结果显示,实验组中GSK-3 βmRNA和蛋白的表达均显著降低(均P＜0.01).结论 有效建立慢病毒介导的GSK-3β基因稳定沉默表达的SH-SY5Y细胞模型,为体外评价研究GSK-3β沉默后药物或行为治疗AD提供试验工具细胞模型.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	边卫	济南市第四人民医院内分泌科	5	10	2.0	3.0
2	陈雯	山东大学附属济南市中心医院神经内科	4	29	3.0	4.0
3	边红	山东大学附属济南市中心医院神经内科	7	42	3.0	6.0
4	孙金波	山东大学附属济南市中心医院神经内科	2	3	1.0	1.0
5	李严霜	山东大学附属济南市中心医院神经内科	2	29	1.0	2.0