过表达MyoD1基因山羊胎儿成纤维细胞系的建立及其成肌诱导分化

• 作者: 张亚妮 朱才业 李伟 李碧春 邱峰龙 郑蒙蒙 韦光辉
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: MyoD1基因 基因克隆 异位表达 成肌分化
• 年，卷（期）: 2013,（14）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 3032-3039
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.14.019

摘要

[目的]通过建立过表达MyoD1基因山羊胎儿成纤维细胞系研究MyoD1基因的异位表达研究其在成肌分化中的生物作用.[方法]采用RT-PCR从激活的骨骼肌卫星细胞中克隆MyoD1基因,并将其cDNA终止密码子TGA定向突变为GGA,定向克隆至带有增强型水母绿色荧光蛋白(ehanced green fluorescent protein,eGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1中,构建融合蛋白表达载体pEGFP-MyoD1,经过酶切、测序鉴定后,采用LipofectiminTM LTX转染山羊胎儿成纤维细胞(goat embryonic fibroblast,GEF)以建立MyoD1异位表达细胞株并采用成肌诱导分化培养液进行成肌诱导分化,探究MyoD1在成肌过程中的生物学功能.[结果]成功克隆山羊MyoD1基因,并在MyoD1的开放阅读框(ORF)两端引入肋XhoⅠ/EcoRⅠ酶切位点,将其终止密码子TGA定点突变为GGA,定向克隆至pEGFP-N1真核表达载体,获得融合蛋白表达载体pEGFP-MyoD1;经G418 (400μg·mL-1)筛选2周后,获得MyoD1异位表达的GEF细胞株;间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测结果显示该细胞株能够表达Myf-5等成肌相关免疫学标志;采用成肌分化培养基分化培养处理2-3d可见少量肌管产生,并表达MyoG、Desmin和MyHC等早期成肌分化标志,处理5d可见大量肌管形成.[结论]成功克隆出山羊MyoD1基因,构建了pEGFP-MyoD1真核表达载体并建立过表达MyoD1 GEF细胞系,过表达MyoD1 GEF系能够在成肌诱导培养液诱导形成肌管.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李碧春	扬州大学动物科学与技术学院	189	1267	18.0	27.0
2	李伟	扬州大学动物科学与技术学院	59	185	8.0	10.0
3	张亚妮	扬州大学动物科学与技术学院	40	56	4.0	6.0
4	郑蒙蒙	扬州大学动物科学与技术学院	6	16	3.0	4.0
5	邱峰龙	扬州大学动物科学与技术学院	7	15	3.0	3.0
6	朱才业	扬州大学动物科学与技术学院	4	9	1.0	3.0
7	韦光辉	扬州大学动物科学与技术学院	6	9	1.0	3.0