肝素黄杆菌肝素酶Ⅲ基因hepC的可溶表达体系构建及酶学性质研究

• 作者: 叶逢春 吴敬君 张翀 李晔 苏楠 邢新会
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 肝素酶Ⅲ 麦芽糖结合蛋白 重组表达 纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 133-139
• 语种: 中文

摘要

肝素酶Ⅲ(HepC)是肝素结构分析及酶法制备低分子量肝素的重要生物催化剂.为实现HepC在大肠杆菌中的可溶表达,通过PCR方法从肝素黄杆菌(Flavobacterium heparinum)的基因组中扩增得到HepC基因,采用融合蛋白方法构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)与HepC融合的表达载体和体系,并在低温(15℃)下诱导重组大肠杆菌,显著提高了MBP-HepC重组表达的可溶性.通过摇瓶培养发酵液的HepC比酶活达到46.41IU/mg,超过目前报道的最高水平.通过MBP与直链淀粉的亲和吸附实现了MBP-HepC的亲和分离和纯化,一步亲和纯化后蛋白的纯度即可达95％以上.该融合酶基本特性研究表明,融合肝素酶Ⅲ(MBP-HepC)的最适作用pH7.3,最适作用温度为42℃-48℃.热稳定性较好,其30℃时的稳定性高于融合肝素酶Ⅰ(MBP-HepA).

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邢新会	清华大学化学工程系生物化工研究所	74	1458	22.0	36.0
2	张翀	清华大学化学工程系生物化工研究所	23	432	8.0	20.0
3	李晔		14	66	5.0	8.0
5	叶逢春	清华大学化学工程系生物化工研究所	3	28	3.0	3.0
6	苏楠	清华大学化学工程系生物化工研究所	8	181	6.0	8.0
9	吴敬君	清华大学化学工程系生物化工研究所	2	10	2.0	2.0