人白细胞介素-2原核表达条件优化和表达产物纯化

• 作者: 吉学桥 张利清 成勇 陆睿
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 生物学
• 关键词: IL-2 pET100/D-TOPO载体 诱导 可溶性蛋白 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2013,（10）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 21-25
• 页数: 5页
• 分类号: Q816
• 字数: 4941字
• 语种: 中文

摘要

通过构建原核表达载体、优化原核表达条件和纯化表达产物来获得人白细胞介素-2(IL-2)的融合蛋白(His-IL2).将IL-2基因连接到pET100/D-TOPO载体中,经酶切鉴定和测序,构建了pET-IL2质粒.将质粒转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中,通过优化诱导温度、诱导时间及IPTG诱导终浓度来减少包涵体的生成,从而提高可溶性蛋白的产量,由SDS-PAGE和Western blot证明IPTG诱导终浓度为0.6mmol/L、温度为25℃,诱导5h时可溶性蛋白含量明显高于包涵体,且该融合蛋白能够被特异性抗体所识别.分别以葡聚糖凝胶层析和Ni-IDA树脂亲和层析纯化His-IL2融合蛋白,比较两种不同的纯化方法对其蛋白纯化效率的影响,SDS-PAGE分析得出Ni-IDA树脂亲和层析对此融合蛋白纯化的特异性高,纯度达到85％左右.His-IL2融合蛋白的优化表达和纯化为进一步研究融合蛋白的活性与功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成勇	扬州大学动物转基因与胚胎工程实验室	35	145	8.0	9.0
2	陆睿	扬州大学动物转基因与胚胎工程实验室	8	4	1.0	1.0
3	吉学桥	扬州大学动物转基因与胚胎工程实验室	1	1	1.0	1.0
4	张利清	扬州大学动物转基因与胚胎工程实验室	1	1	1.0	1.0