两个苹果乙烯反应因子MdAP2D4与MdAP2D19的序列分析及原核表达

• 作者: 丛佩华 刘志 安秀红 田义 郝玉金 郝红梅 陈可钦
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 抑制性消减杂交 茉莉酸甲酯 乙烯反应因子 原核表达 抗病性
• 年，卷（期）: 2013,（17）
• 所属期刊栏目: 园艺
• 页码范围: 3635-3642
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.17.012

摘要

[目的]克隆苹果中的两个ERF (ethylene responsive factor)转录因子,对其序列与表达进行分析；并进一步构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导融合蛋白表达,为解析两基因的抗病功能及作用机制奠定基础.[方法]首先,将抑制性消减杂交筛选到的EST序列进行BLAST比对,根据比对获得的MdAP2D4与MdAP2D19的cDNA序列设计引物进行克隆;然后,利用MEGA4.1软件将两个ERF蛋白与拟南芥的AP2家族蛋白进行聚类分析,对保守的AP2功能域的氨基酸序列进行分析;并进一步利用RT-PCR检测两基因对外源MeJA的响应;最后,将两个基因分别连接到原核表达载体PGEX-4T-1上,利用IPTG对转化的大肠杆菌BL21进行诱导.[结果]MdAP2D4与MdAP2D19两个基因均与拟南芥B3组ERF亲缘关系最近,在叶片中表达较高,都能被外源的MeJA诱导表达.SDS-PAGE 检测结果表明,两个基因的融合蛋白均能够被IPTG诱导表达.[结论]MdAP2D4与MdAP2D19为B3组ERF转录因子,外源MeJA能够诱导其表达.