人乳头瘤病毒16型E2蛋白表达、纯化及抗血清制备

• 作者: 刘明明 唐丽萍 商庆龙 孙宇辉 张光虹 张沿君 谷鸿喜 魏兰兰
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒16型 E2蛋白 表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2013,（9）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 940-944
• 分类号: R373.9|R392-33|R392.11
• 语种: 中文

摘要

目的 表达人乳头瘤病毒16型(HPV16) E2蛋白,并制备小鼠抗HPV16 E2血清.方法 采用PCR技术扩增HPV16E2基因,构建入pET21b载体,重组表达载体pET21 b-HPV16E2经鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3),诱导表达并鉴定表达产物.经纯化、变性和复性方法,制备可溶性HPV16 E2蛋白.免疫BALB/c小鼠制备抗血清,检测小鼠IFN-γ、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4/CD8比值和抗血清滴度变化.结果 酶切和测序结果表明pET21b-HPV16 E2构建成功.表达蛋白相对分子质量(Mr)为42 000,Western blot法证明具有较高特异性.小鼠抗血清效价升高,CD4+T细胞数量和CD4/CD8比值升高,小鼠IFN-γ无升高.结论 成功制备可溶性HPV16 E2蛋白和小鼠抗HPV16 E2高效价的抗血清.